關(guān)于防己滲漉研究論文
1儀器與材料
高效液相色譜儀，P680A，美國(guó)戴安；UV-1100紫外分光光度計(jì)，北京瑞利分析儀器有限公司；751G分光光度計(jì)，上海分析儀器廠；電子天平，0.0001g/0.00001g,XR205SM-DR，瑞士普利賽斯。滲漉筒，500ml，自制。
防己，購(gòu)于成都市荷花池藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地：浙江，含粉防己堿1.13%；粉防己堿對(duì)照品，含量測(cè)定用，批號(hào)0711-20005，中國(guó)藥品生物制品檢定所產(chǎn)品；乙醇，醫(yī)用，95%，購(gòu)于宜賓保康藥業(yè)瀘州分公司；其余試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1方案設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，滲漉工藝的主要影響因素為乙醇濃度、浸泡時(shí)間、乙醇倍數(shù)、滲漉速度等，故選定以上4個(gè)考察因素，每個(gè)因素設(shè)三水平，以防己總堿、粉防己堿的提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)（權(quán)重系數(shù)均為0.5），按L9(34)正交表實(shí)驗(yàn)，表頭設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。表1因素水平（略）
稱取防己粗粉100.0g，加入1倍量相應(yīng)濃度的乙醇，攪拌均勻，密閉放置2h,待藥粉充分膨脹和潤(rùn)濕后，裝筒，按《中國(guó)藥典》2005年版滲漉法［1］實(shí)驗(yàn)，加入相應(yīng)濃度的乙醇，浸泡12～48h，開(kāi)始滲漉，流速1～5ml·min-1·kg-1，收集相應(yīng)量的滲漉液，并用相同濃度的乙醇定容到1000ml，得樣品液（含生藥0.1g/ml）。
2.2總生物堿的含量測(cè)定
2.2.1貯備液的制備精密稱取5mg粉防己堿對(duì)照品，至10ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻（0.496mg/ml）。
2.2.2最大吸收波長(zhǎng)的選擇精密稱取粉防己堿對(duì)照品1mg，置25ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，精密吸取0.2ml，置10ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。采用紫外分光光度法，在波長(zhǎng)200～400nm處進(jìn)行掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1。粉防己堿的最大吸收波長(zhǎng)為282nm。
2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密量取貯備液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2ml，置10ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。以乙醇為空白，在282nm處測(cè)定吸收度，根據(jù)測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求得回歸方程：A=12.949309C-0.063,相關(guān)系數(shù)r=0.99998。
2.2.4樣品的測(cè)定分別精密量取樣品溶液5ml,置100ml燒杯中，水浴蒸干，殘?jiān)踊旌先軇ㄒ颐眩郝确拢阂掖迹?0%氨水，25∶8∶2.5∶1）40ml，攪拌后浸泡10min，超聲處理10min，放置片刻，傾濾，殘?jiān)没旌先軇┫礈?次，5ml/次，濾液水浴蒸干，殘?jiān)靡掖既芙獠⒍ㄈ葜?5ml，精密量取上述溶液1ml，置10ml容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，以乙醇作空白，于282nm處測(cè)定吸收度，計(jì)算總生物堿含量。結(jié)果見(jiàn)表2。
2.3粉防己堿含量測(cè)定
2.3.1色譜條件色譜柱為DikmaKromasilC18(250mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相為乙腈∶甲醇∶0.06%二乙胺溶液（60∶20∶20），檢測(cè)波長(zhǎng)282nm，流速1.0ml/min,進(jìn)樣量10μl。
2.3.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取粉防己堿對(duì)照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻（1mg/ml）。
2.3.3供試品溶液的制備精密量取樣品液10ml，置50ml蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，轉(zhuǎn)入25ml量瓶，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，離心，取上清液，0.22μm濾膜過(guò)濾。
2.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定取上述對(duì)照品溶液用流動(dòng)相稀釋，制備成每毫升含0.05，0.10，0.25，0.50，0.75，1.00mg粉防己堿的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣5μl，以粉防己堿的峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)作圖，求得粉防己堿的回歸方程為：A=63.8738C-0.3118，r=0.9998，粉防己堿濃度在0.05～1.0mg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。
2.3.5測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液(0.25mg/ml)與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量，即得。液相色譜圖見(jiàn)圖2～3，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。表2防己滲漉正交實(shí)驗(yàn)表及結(jié)果（略）表3方差分析（略）
直觀分析及方差分析表明，乙醇濃度對(duì)防己的滲漉工藝有極顯著影響，故選擇最佳濃度A1，而B(niǎo)，C，D因素對(duì)工藝的影響較小，從方便生產(chǎn)、節(jié)約成本的角度，選擇浸泡24h,(B2)，收集6倍量滲漉液（C1），滲漉速度為快速（D3）。即A1B2C1D3。據(jù)此條件，驗(yàn)證3批。結(jié)果見(jiàn)表4。表4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)（略）
3討論
在方法學(xué)研究中，參照文獻(xiàn)資料我們考察了∶甲醇-水(40∶60)，甲醇-水-二乙胺(82∶18∶0.2)，甲醇-水(83∶17，含0.5g/L的.三乙胺)，甲醇-乙腈-水-二乙胺(65∶25∶10∶0.08)，甲醇-乙腈-0.003moL/LKH2PO4-二乙胺(55∶25∶20∶0.06)等多種流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果表明本文方法分離度好，分離效能高。流動(dòng)相中加入少量二乙胺，能較好地改善分離度，并使峰形更好。
驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，優(yōu)選工藝收得率與正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果接近，但優(yōu)選工藝節(jié)約了乙醇，減少了時(shí)間，降低了生產(chǎn)成本，粉防己堿的提取率達(dá)到了83%，說(shuō)明本工藝合理可行，適用于大生產(chǎn)。
從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，隨著防己總堿提取率的增高，粉防己生物堿的提取率也相應(yīng)增高，說(shuō)明兩者的含量之間有一定對(duì)應(yīng)關(guān)系。
防己總堿的檢測(cè)參照文獻(xiàn)方法［3］，采用了混合溶劑�？梢杂行У乇苊怆s質(zhì)干擾。
【參考文獻(xiàn)】
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【摘要】目的研究防己滲漉提取的最佳工藝。方法以防己總堿和粉防己堿為考察指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)防己的滲漉工藝進(jìn)行研究。結(jié)果確定了最佳工藝條件為浸漬24h，60%乙醇6倍量滲漉，滲漉速度為快速。結(jié)論工藝合理可行，可應(yīng)用于生產(chǎn)。
【關(guān)鍵詞】防己滲漉正交實(shí)驗(yàn)總生物堿粉防己堿
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