一、創(chuàng)意說明：

　　實驗是科學之母，才智是實驗之子。一切推理都必須從觀察與實驗得來，學會積極地動手動腦，在實驗中學習、體會科學與真理，必定會為孩子的成長之路灑下一片更燦爛的陽光。我們大家都知道人、動物、鳥類都是用腿走路的，但是我們?nèi)粘Ｉ�活中見到的玻璃杯雖然沒有腿也可以走路，你相信嗎？

　　二、實驗材料：

　　玻璃杯1個、蠟燭1支、火柴1盒、玻璃板1塊、厚書2本、自來水少許

　　三、實驗步驟；

　　1、首先把玻璃板放在自來水中浸泡一下。

　　2、接著把玻璃板的一頭放在桌子上，另一頭用兩本書墊起。

　　3、再次將玻璃杯的杯口沾一些水，然后倒扣在玻璃板的上端。

　　4、最后將蠟燭點燃后去烤杯子的底部和四周。

　　四、實驗結(jié)果

　　我神奇地發(fā)現(xiàn)倒立在玻璃板上的玻璃杯居然自己慢慢地從上面“走”了下來。

　　五、注意事項

　　經(jīng)過自己多次反復的實驗，我發(fā)現(xiàn)兩本書加起來的高度大約只要在5厘米左右，如果太高或太低的話，玻璃杯在“向下走”的過程中不會很自由順利、很自然。

　　六、研究結(jié)果

　　用蠟燭去烤玻璃杯底部和四周的時候，杯子中的空氣受熱膨脹，體積變大，裝不下的空氣就會往外擠，但是由于杯口是倒立著的，并且又被一層水封閉著，熱空氣出不去，就只能把杯子向上頂起一點，在自身重量的作用下，杯子就自己慢慢地向下“走”了。

　　七、實驗心得

　　通過這個實驗我認為創(chuàng)新是一個民族的靈魂，是國家強盛和社會發(fā)展的動力，是人才成長的基因，小學生科技創(chuàng)新能力的培養(yǎng)要從小做起、從現(xiàn)在做起、從小事做起。

綜合性實驗報告3

　　本科學生綜合性實驗報告

　　學號

　　姓名

　　學院

　　專業(yè)、班級

　　實驗課程名稱：

　　教師及職稱

　　開課學期

　　至

　　學年

　　學期

　　填報時間×年×月×日

　　云南師范大學教務(wù)處編印

　　實驗設(shè)計方案

　　實驗序號

　　實驗名稱

　　實驗時間

　　實驗室

　　一、實驗?zāi)康?/strong>

　　1、學習并掌握小鼠骨髓細胞染色體的制備方法。

　　2、觀察小鼠染色體的形態(tài)特征,統(tǒng)計細胞的染色體數(shù)目。

　　3、了解微核發(fā)生的機制；

　　4、掌握微核實驗的一般程序和實踐意義；

　　5、掌握對實驗動物進行藥物處理的一般程序；

　　6、掌握進行實驗設(shè)計的一般程序和規(guī)則，并鍛煉實踐能力。

　　二、實驗原理、實驗流程或裝置示意圖

　　1、骨髓細胞具有高度的分裂增殖能力。因此可以直接得到中期細胞而不必象血淋巴細胞或組織那樣要經(jīng)過體外培養(yǎng)。經(jīng)秋水仙素處理后，分裂增殖中的骨髓細胞由于紡綞體的形成受到抑制，染色體不能正常趨向兩極而使之停留于中期，同時染色體縮短，輪廓清晰，把收獲的細胞進行低滲，固定處理，使細胞處于膨脹狀態(tài)，再將細胞懸液滴在載片上，使細胞破裂，染色體散開，染色后即可觀察到染色體。

　　2、微核（Micronucleus）：染色單體或染色體的無著絲點斷片，或因紡錘體受損而丟失的整個染色體，在細胞分裂后期，仍然遺留在細胞質(zhì)中。末期之后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在子細胞的胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。凡能使染色體發(fā)生斷裂或使染色體和紡錘體聯(lián)結(jié)損傷的化學物，都可用微核試驗來檢測。各種類型的骨髓細胞都可形成微核，但有核細胞的胞質(zhì)少，微核與正常核葉及核的突起難以鑒別。

　　嗜多染紅細胞是分裂后期的紅細胞由幼年發(fā)展為成熟紅細胞的一個階段，此時紅細胞的主核已排出，因胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體，姬姆薩染色呈灰藍色，成熟紅細胞的核糖體已消失，被染成淡桔紅色。骨髓中嗜多染紅細胞數(shù)量充足，微核容易辨認，而且微核自發(fā)率低，因此，骨髓中嗜多染紅細胞成為微核試驗的首選細胞群。

　　三、實驗設(shè)備及材料

　　1、材料：小白鼠（2n=40）

　　2、器具：注射器（1ml，5ml各一支）、托盤、解剖剪、鑷子、吸管、離心管、離心機、載片、濾紙、白紗布小塊等。

　　3、藥品：0.15mg/ml秋水仙素，1%檸檬酸三鈉，固定液（3份甲醇，1份冰乙酸，臨用時現(xiàn)配），Giemsa染液，2.2%檸檬酸鈉，0.01M磷酸緩沖液（PBS）pH6.8。

　　4、生物顯微鏡、解剖剪、鑷子、注射器、載玻片、蓋玻片、塑料吸瓶、吸水紙等。

　　四、實驗方法步驟及注意事項

　　一、小鼠骨髓細胞染色體標本制備與觀察

　　1、處理：用1.5mg/kg秋水仙素腹腔注射處理小鼠（注射量為0.1ml/10g體重）。即用以上配制的秋水仙溶液按每10g體重注射0.1ml。注射后24小時，可以取骨

　　2、處死：斷頸法處死小鼠。剪刀剪開腿部的皮膚，用鑷子夾住小鼠的股骨，剪去股骨周圍的肌肉，將小鼠的'兩股骨取出，擦凈股骨上的肌肉。去股骨的髖面，將吸有2.2%檸檬酸三鈉溶液的小注射器的針頭插入，反復幾次吹出骨髓細胞，反復吹打直至股骨呈白色，制成細胞懸液。

　　3、低滲：將細胞懸液在1000rpm/min離心5min，棄除上清液，留0.5ml搖勻。向細胞液中再加入1%的檸檬酸三鈉溶液5ml用吸管輕吹打均勻，在室溫低滲30min。低滲期間，配制固定液，即甲醇：冰醋酸為3:1（v/v)，置4℃冰箱中備用。

　　4.預(yù)固定(1次)：低滲處理后的細胞懸液離心5分鐘，留1ml原液，搖勻。加入新配制的固定液至6ml，吹打均勻，固定5分鐘，再在1000rpm/min離心3-5min，去掉上清液。

　　5、固定（2次）：沿離心管壁慢慢加入新配制的固定液6ml，用吸管輕輕吹打均勻，室溫下固定5min，1000rpm/min3min，棄去上清；如此反復固定兩次（共固定3次）。

　　6.根據(jù)管底細胞量的多少，加入新配制的固定液0.3~0.8ml，用吸管打均勻，使其形成細胞懸液。

　　7.滴片：將預(yù)冷的載玻片（0℃冰�。�，水平或傾斜45°角放置，用吸管吸取細胞懸液，從約0.5-1m高處滴1~2滴到片子上，用口將其吹干，靜置使其干燥。

　　8.染色：將干燥的玻片放入2ml吉姆薩原液加入40ml磷酸緩沖液（pH6.8）配成的染液中染色20min，用磷酸緩沖液（pH6.8）沖洗，晾干后鏡檢。

　　二、微核試驗方法：

　　1、骨髓的制取：斷頸法處死小鼠。用剪刀剪開腿部的皮膚，用鑷子夾住小鼠的股骨，剪去股骨周圍的肌肉，將小鼠的兩股骨取出，擦凈股骨上的肌肉。去股骨的髖面，將吸有0.85%Nacl生理等滲液小注射器的針頭插入，反復幾次吹出骨髓細胞。反復吹打使其混合均勻，制成細胞懸液。將細胞懸液在1000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄除上清液。2、涂片：在離心管中加入少量的小牛血清（約0.3ml)混勻后，按血常規(guī)涂片法涂片，長度約2cm~3cm(涂片時一次涂成）。在空氣中晾干。

　　3、固定：將干燥的涂片放入甲醇液中固定5min。即使當日不染色，也應(yīng)固定后保存。

　　4、染色：將固定過的涂片放入Giemsa應(yīng)用液中，染色20min~30min，然后立即用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液沖洗。

　　5、封片：用濾紙及時擦干染片背面的水滴，再用雙層濾紙輕輕按壓染片，以吸附染片上殘留的水分，再在空氣中晃動數(shù)次，以促其盡快晾干，然后放入二甲苯中透明5min，取出滴上適量光學樹脂膠，蓋上蓋玻片，寫好標簽。

　　每只動物計數(shù)1000個嗜多染紅細胞，觀察含有微核的嗜多染紅細胞數(shù)，微核率以千分率表示。

　　數(shù)據(jù)處理：利用統(tǒng)計學軟件SPSS的單因素方差分析或t檢驗等方法，進行數(shù)據(jù)處理，分析實驗結(jié)果（如后表）。

　　五、實驗數(shù)據(jù)處理方法

　　微核試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計總表1：

　　受試物

　　劑量mg/Kg

　　組別

　　各受試小鼠1000個受檢細胞中含微核細胞數(shù)

　　1

　　2

　　3

　　4

　　5

　　6

　　7

　　8

　　對苯二酚

　　120

　　1

　　38

　　33

　　35

　　37

　　34

　　35

　　36

　　30

　　80

　　2

　　28

　　31

　　30

　　32

　　29

　　28

　　33

　　27

　　40

　　3

　　20

　　25

　　21

　　23

　　28

　　26

　　24

　　22

　　秋水仙素

　　3

　　1

　　36

　　33

　　32

　　34

　　35

　　31

　　31

　　37

　　1.5

　　2

　　29

　　25

　　23

　　26

　　24

　　27

　　25

　　24

　　1

　　3

　　24

　　21

　　23

　　20

　　19

　　25

　　22

　　19

　　氯化汞

　　3

　　1

　　22

　　25

　　20

　　26

　　21

　　23

　　22

　　18

　　2

　　2

　　16

　　22

　　21

　　19

　　20

　　18

　　17

　　15

　　1

　　3

　　13

　　17

　　15

　　16

　　14

　　15

　　17

　　13

　　陰性對照蒸餾水

　　3

　　2

　　1

　　4

　　3

　　5

　　3

　　9

　　陽性對照環(huán)磷酰胺

　　40mg/kg體重

　　38

　　44

　　45

　　40

　　36

　　41

　　43

　　39

　　表2

　　對苯二酚對動物骨髓嗜多染紅細胞微核發(fā)生率

　　組

　　別

　　劑量

　　動物數(shù)

　　受檢細胞數(shù)

　　含微核細胞數(shù)

　　微核率

　　P值

　　(g/kg體重)

　　(只)

　　(個)

　　(個)

　　(‰)

　　受試物

　　120

　　8

　　8000

　　對苯二酚

　　80

　　8

　　8000

　　40

　　8

　　8000

　　溶劑對照（蒸餾水）

　　8

　　8000

　　陽性物對照

　　環(huán)磷酰胺

　　(mg/kg體重)

　　40

　　6．參考文獻

　　[1]孟紫強，阮愛東，桑楠等.SO2污染對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的誘發(fā)作用.環(huán)境科學，20xx，23（4）123-125.

　　[2]孟紫強，桑楠，張波等.二氧化硫體內(nèi)衍生物誘發(fā)小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的效應(yīng).環(huán)境科學學報，20xx，20（2）239-243.

　　[3]耿德貴，王秀琴，劉士旺等.除草劑使它隆對黃鱔細胞的致突變作用研究.環(huán)境與健康雜志，20xx，17（2）103-105.

　　[4]周曉蓉，李百祥，邱向紅等.小鼠骨髓及肝血中嗜多染紅細胞微核率的比較.衛(wèi)生毒理學雜志，1999，13（1）66-67.

　　[5]

　　曹佳.微核實驗在中國的應(yīng)用、發(fā)展與展望.遺傳，20xx，25（1）73-76.

　　二．實驗報告

　　1．實驗現(xiàn)象與結(jié)果

　　2．對實驗現(xiàn)象、實驗結(jié)果的分析及其結(jié)論

　　3．實驗總結(jié)

教師評語及評分：

　　簽名：×年×月×日

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