青絲線草多糖分析論文參考
【摘要】目的建立青絲線草中多糖的含量測(cè)定方法。方法采用苯酚—硫酸比色法。結(jié)果測(cè)得含量為13.74%，精密度及重復(fù)性良好，回收率為99.35%,RSD為1.3%。結(jié)論此方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確性好，為青絲線草的質(zhì)量控制提供了一個(gè)定量方法和參考依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】青絲線草；多糖
1儀器與材料
1.1儀器WFH-207B三用紫外分析儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；SB-5200超聲波提取器（上海新芝生物技術(shù)研究所）；AB204-N電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；TDA-8002型恒溫水浴箱（余姚工業(yè)儀器二廠）。
1.2試劑無(wú)水葡萄糖（批號(hào)：0403251，廣州新成化工廠，AR級(jí)），其余化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)AR級(jí)。
1.3樣品青絲線草產(chǎn)自廣東江門(mén)地區(qū)，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室周誠(chéng)教授鑒定為爵床科槍刀藥屬植物槍刀藥Hypoestespurpurea(L.)Soland的全草。
2方法與結(jié)果
2.1青絲線草多糖的提取與精制稱(chēng)取青絲線草粗粉50g，置圓底燒瓶中，加石油醚（60～90℃）400ml，浸泡2h，回流提取1h，濾過(guò)，濾渣揮干溶媒，以80%乙醇400ml回流提取2次，1h/次，濾過(guò)，濾渣置圓底燒瓶中，加蒸餾水600ml浸泡1h后回流提取1h，濾過(guò)，再加蒸餾水400ml回流提取1h，濾過(guò)，濾液合并，濃縮至200ml，Sevage法除蛋白后加95%乙醇使含醇80%，靜置過(guò)夜，抽濾，濾渣以無(wú)水乙醇、丙酮依次洗滌多次，得精制多糖，60℃烘干備用。
2.2苯酚試液的配制取苯酚100g，加鋁片0.1g和碳酸氫鈉0.05g，蒸餾，收集182℃餾分。稱(chēng)取5g，加水溶解，定容于100ml棕色容量瓶（臨用前新配）。
2.3測(cè)定波長(zhǎng)的`選擇精密吸取0.02mol/ml葡萄糖溶液2.0ml，置15ml具塞試管中，加苯酚試劑1.0ml混勻，加濃硫酸5.0ml，混勻，放置15min，置40℃水浴中加熱10min，取出放置15min，以蒸餾水同法操作為空白，在460～510nm測(cè)定吸收度，確定最大吸收波長(zhǎng)為488nm。
2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱(chēng)取經(jīng)105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖505.6mg，置50ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)液貯備液。取此貯備液分別稀釋為0.005056，0.010112，0.020224，0.040448，0.050560mg/ml的5個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液。精密吸取溶液各2.0ml置10ml具塞試管中，加苯酚試劑1.0ml混勻，再迅速加入濃硫酸5.0ml混勻，放置15min后置40℃水浴中加熱10min，取出放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，照分光光度法在488nm處測(cè)定吸收度。求得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：A=12.975C+0.012,r=0.9998（n=5）。樣品在0.005～0.05mg/ml的范圍內(nèi)線性良好。
2.5換算因素的測(cè)定取60℃干燥至恒重的精制青絲線草多糖約10mg，精密稱(chēng)定，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取該溶液2.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自“加苯酚試劑1.0ml”起，依法測(cè)定吸收度，按下式計(jì)算換算因素：f=Cs/C(Cs為多糖液濃度，C為多糖液中葡萄糖濃度)。計(jì)算得f=3.93。
2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液及精制多糖溶液各2.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自“加苯酚試劑1.0ml”起，依法測(cè)定吸收度，并分別于0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，60min測(cè)定，結(jié)果表明樣品液至少在1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.7精密度實(shí)驗(yàn)取樣品約0.2g，精密稱(chēng)定，按樣品測(cè)定項(xiàng)下操作，測(cè)吸收度，結(jié)果RSD=0.82%（n=6）。
2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取藥材粉末6份，精密稱(chēng)定，按樣品測(cè)定項(xiàng)下操作，測(cè)吸收度，計(jì)算得RSD=0.75%（n=6）。結(jié)果表明該方法具有較好的重復(fù)性。
2.9回收率實(shí)驗(yàn)取藥材粉末6份，每份約0.1g，精密稱(chēng)定，精密加入精制多糖約13mg，按樣品測(cè)定項(xiàng)下操作，測(cè)吸收度。結(jié)果見(jiàn)表1。表1回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
回收率（%）=(測(cè)得量-樣品中多糖含量)/多糖加入量×100%
2.10樣品測(cè)定取樣品粉末約0.2g，精密稱(chēng)定，加80%乙醇100ml，超聲振蕩提取20min，過(guò)濾，藥渣用熱80%乙醇洗滌，揮干乙醇后加蒸餾水100ml超聲振蕩提取20min，過(guò)濾，濾渣再加80ml蒸餾水超聲振蕩提取20min，過(guò)濾，殘?jiān)脽崴礈�，洗液并入提取液，待冷后轉(zhuǎn)移于250ml容量瓶，加蒸餾水稀釋至刻度，精密吸取2.0ml，置10ml具塞試管中，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線”項(xiàng)下方法自“加苯酚試劑1.0ml”起，依法操作，測(cè)得吸收度，計(jì)算樣品中多糖含量。結(jié)果見(jiàn)表2。表2青絲線草多糖含量測(cè)定結(jié)果（略）
3討論
本文利用苯酚—硫酸法測(cè)定了青絲線草的主要活性成分—多糖，作為評(píng)價(jià)該草藥質(zhì)量的指標(biāo)之一。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究為首次報(bào)道，本文對(duì)青絲線草的主要化學(xué)成分的研究結(jié)果為開(kāi)拓新藥源提供了新的科學(xué)用藥依據(jù)。
多糖含量的測(cè)定有多種方法，本文選用苯酚—硫酸法，生成橙黃色溶液，在488nm處有特征吸收。此方法方便簡(jiǎn)單，最為常用，但需嚴(yán)格控制水解條件，否則誤差較大。
本實(shí)驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，所用儀器簡(jiǎn)單，消耗成本低，在缺乏先進(jìn)檢測(cè)儀器的基層單位，實(shí)為一種可靠、簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法。
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