關(guān)于HPLC法測(cè)定清開(kāi)靈膠囊中梔子苷的含量論文

　　清開(kāi)靈膠囊由金銀花、板藍(lán)根、梔子、水牛角、膽酸等組成,具有清熱解毒功效,主治上呼吸道感染、病毒性感染、高熱等癥。梔子苷為梔子的主要有效成分之一,清開(kāi)靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)目前未收載梔子苷含量測(cè)定方法,為了更好控制藥品質(zhì)量,我們采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定該制劑中的梔子苷含量,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該方法分離度高、重復(fù)性好,獲得了滿意的結(jié)果。

　　1、儀器與試藥

　　Agilent 1100型HPLC儀,Rev.B.02.01 SR1色譜工作站,Gracesmart C18色譜柱(250 mm×4.0 mm,5 μm)；超聲波處理儀MUS/1006。梔子苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,批號(hào)110749-200613)；清開(kāi)靈膠囊樣品(廣州白云山明興制藥有限公司,批號(hào)Mk2901、Mk2902、Mk2903)。乙腈、甲醇為色譜純。

　　2、方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件

　　色譜柱為Gracesmart C18(250 mm×4.0 mm,5 μm),流動(dòng)相為乙腈-水(15∶85),檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm,流速為1.0 mL/min,進(jìn)樣量10 μL[1]。

　　2.2 供試溶液的制備

　　2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

　　精密稱取梔子苷對(duì)照品15.1 mg,置50 mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,精密量取5 mL,置100 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成每1 mL含15.1 μg的`溶液,即得。

　　2.2.2 供試品溶液的制備

　　取本品10粒,除去膠囊殼,內(nèi)容物精密稱定,研細(xì),取粉末0.25 g,精密稱定,置25 mL量瓶中,加甲醇20 mL,超聲處理(功率300 W,頻率33 kHz)30 min,放冷,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò),即得。

　　2.2.3 陰性樣品溶液的制備

　　按處方組成,取除梔子外的其余藥味,按工藝要求制成不含梔子苷的清開(kāi)靈膠囊,再按供試品溶液的制備方法操作,得陰性樣品溶液。

　　2.3 空白試驗(yàn)

　　按上述儀器和實(shí)驗(yàn)條件,取Mk2901批供試品溶液、陰性樣品溶液、梔子苷對(duì)照品溶液分別注入液相色譜儀,測(cè)定。結(jié)果供試品色譜圖中,呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰,且基線平穩(wěn),分離度好,陰性樣品在此保留時(shí)間無(wú)色譜峰。

　　2.4 線性關(guān)系

　　分別精密吸取濃度為0.302 mg/mL對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,分別吸取10 μL注入液相色譜儀,測(cè)得峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo),梔子苷對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程：Y＝1 351.973X－4.454,r＝0.999 8,在0.060 4～0.302 0 μg范圍內(nèi),對(duì)照品進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

　　2.5 精密度試驗(yàn)

　　取Mk2901批供試品溶液,按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積,計(jì)算其RSD＝0.83%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

　　2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　取Mk2901批供試品溶液,按上述色譜條件分別于0、2、4、6、8、12 h測(cè)定峰面積,計(jì)算其RSD＝0.86%。結(jié)果表明樣品在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

　　2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

　　取本品內(nèi)容物(批號(hào)Mk2901)10 g,混合均勻,精密稱取樣品5份,每份0.25 g。按供試品溶液制備方法制備,依上述測(cè)定條件測(cè)定,并計(jì)算含量,結(jié)果平均含量為1.602 4 mg/g,RSD＝1.22%。表明本法重復(fù)性好。

　　2.8 加樣回收率試驗(yàn)

　　精密量取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的樣品0.1 g各5份,分別精密加入濃度為302 μg/mL的梔子苷對(duì)照品溶液0.5 mL,按供試品溶液制備方法處理得供試品溶液,按上述色譜條件測(cè)定,計(jì)算回收率,結(jié)果表明此色譜條件測(cè)定梔子苷含量回收率良好。見(jiàn)表1。表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）

　　2.9 樣品測(cè)定

　　分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10 μL,分別注入液相色譜儀,依上法測(cè)定,即得。依上述色譜條件測(cè)定Mk2901、Mk2902、Mk2903批清開(kāi)靈膠囊中梔子苷含量,結(jié)果見(jiàn)表2。表2 梔子苷含量測(cè)定結(jié)果(略)

　　3、討論

　　梔子苷為環(huán)烯醚萜苷類,易溶解于甲醇等溶劑,溶解時(shí)采用超聲處理,有利于促進(jìn)樣品中的梔子苷溶解。梔子苷在238 nm波長(zhǎng)處有最大吸收,故選定238 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。流動(dòng)相比較了乙腈-水(15∶85)和乙腈-水(10∶90)系統(tǒng),梔子苷主峰均可與雜質(zhì)峰分離,為縮短檢測(cè)時(shí)間,故選擇乙腈-水(15∶85)為流動(dòng)相。

　　本試驗(yàn)建立的清開(kāi)靈膠囊中梔子苷含量HPLC測(cè)定方法,靈敏度、穩(wěn)定性及重復(fù)性能夠符合含量測(cè)定的要求,而且操作簡(jiǎn)便,可以作為清開(kāi)靈膠囊生產(chǎn)中梔子苷含量的測(cè)定方法。

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