關(guān)于藥理學(xué)論文
藥理學(xué)是研究藥物與機(jī)體間相互作用規(guī)律及其藥物作用機(jī)制的一門科學(xué)，主要包括藥效動(dòng)力學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)兩個(gè)方面。下面，小編為大家分享關(guān)于藥理學(xué)論文，希望對大家有所幫助！
摘 要：單克隆抗體藥物的問世，使疾病治療的方式發(fā)生了革命性的變化。過去的 20 年，單克隆抗體藥物在癌癥、自身免疫等疾病的治療領(lǐng)域發(fā)揮了重要的作用。單克隆抗體藥物低毒和高特異性優(yōu)勢是其成功的關(guān)鍵。單克隆抗體藥物的這兩個(gè)優(yōu)勢使其快速替代傳統(tǒng)的化學(xué)療法，但其治療效果也同樣受到耐藥性的困擾。耐藥性是導(dǎo)致單克隆抗體藥物治療效果被抑制的原因之一，單克隆抗體藥物靶向結(jié)合腫瘤細(xì)胞后又被清除的情況，稱為抗體的調(diào)制。靶細(xì)胞通過順式或反式方式實(shí)現(xiàn)調(diào)制，并形成二次吞噬，導(dǎo)致細(xì)胞聚集沉淀。本文將對每個(gè)過程的證據(jù)以及應(yīng)對策略進(jìn)行討論。
關(guān)鍵詞：單克隆抗體藥物； Fcγ 受體； 內(nèi)化作用； 削除作用； 免疫療法。
引言
1975 年，Kohler 和 Milstein 對單克隆抗體的制備進(jìn)行了描述，為抗體大規(guī)模應(yīng)用于疾病治療奠定了基礎(chǔ)[1].Kohler 和 Milstein 也因此獲得1984 年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)，他們的技術(shù)導(dǎo)致了最早一代單克隆抗體藥物的誕生。此后，單克隆抗體治療充滿了挑戰(zhàn)，如早年使用鼠原抗體帶來嚴(yán)重的免疫原性問題，隨著嵌合抗體、人源化抗體技術(shù)及噬菌體篩選技術(shù)，小鼠表達(dá)人源抗體技術(shù)以及臨床前及臨床試驗(yàn)監(jiān)管力度的加大，免疫原性問題等有關(guān)單克隆抗體藥物安全性的情況得到了明顯改善。一些單克隆抗體藥物在臨床上表現(xiàn)出潛在的治療效果。抗 CD20 單克隆抗體藥物利妥昔單抗可以明顯提高藥物的響應(yīng)率和患者的總生存期，其批準(zhǔn)上市，標(biāo)志著 B 細(xì)胞惡性腫瘤治療新時(shí)代的開始。單克隆抗體藥物不僅用于 B 細(xì)胞功能障礙相關(guān)疾病的治療，最近，其治療范圍擴(kuò)大到自身免疫性疾病領(lǐng)域，標(biāo)志著單克隆抗體藥物治療已經(jīng)進(jìn)入了“后利妥昔單抗時(shí)代”.
抗腫瘤壞死因子（ TNF,Anti-tumour necrosisfactor） 單克隆抗體藥物英夫利昔單抗（ Infliximab）對自身免疫性疾病的治療產(chǎn)生了重要的影響。1998 年，英夫利昔單抗被批準(zhǔn)用于克羅恩�。� Crohn's disease） 的治療，現(xiàn)在被批準(zhǔn)的適應(yīng)證擴(kuò)大到了強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及潰瘍性結(jié)腸炎等。然而，這兩個(gè)成功的單克隆抗體藥物面臨著同樣的挑戰(zhàn)，即單克隆抗體藥物的耐藥性問題[2].
1 單克隆抗體藥物的藥效機(jī)制
單克隆抗體藥物的藥效機(jī)制同小分子藥物完全不同。例如，單克隆抗體藥物結(jié)合特異靶點(diǎn)分子作用于天然配體（ 如： Infiximab,單克隆抗體藥物的靶點(diǎn)是 TNF-α） ,單克隆抗體藥物還用于信號傳導(dǎo) 的 調(diào) 節(jié) （ Herceptin 阻 止 Her-2neu 的 二 聚化）[3],或用于免疫系統(tǒng)的效應(yīng)調(diào)節(jié)，如啟動(dòng)血清中的補(bǔ)體效應(yīng)，或通過抗體 Fc 同 NK 細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上 Fc 受體結(jié)合而啟動(dòng)的 ADCC 效應(yīng)（ 抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用） .
實(shí)際上，大多數(shù)治療性單克隆抗體是通過 Fc受體，特別是 Fcγ 受體產(chǎn)生細(xì)胞效應(yīng)用于疾病治療。Fcγ 受體屬于進(jìn)化相關(guān)的受體蛋白家族，一般依照其與 IgG 結(jié)合性和下游信號效應(yīng)進(jìn)行分類。人類和小鼠具有高親和力 Fcγ 受體，可以同 IgG單體結(jié)合，其余種屬的 Fcγ 受體屬于中度親和力受體，只能同水溶性 IgG 多聚體或細(xì)胞結(jié)合免疫復(fù)合物結(jié)合。FCγ 受體的主要功能是通過 FcR 區(qū)域的 γ 鏈結(jié)合產(chǎn)生激活信號，γ 鏈包含了免疫受體酪氨酸活化組件。然而，小鼠和人都具有單一的抑制性 FcγRIIB （ CD32B） ,是基于酪氨酸的免疫抑制性受體，可以降低 FcγR 或 SHIP 招募的其他刺激受體的激活作用[4].
研究者以 CD20 單克隆抗體藥物作為研究對象，尋找 FcγR 在單克隆抗體藥物發(fā)揮耐藥的機(jī)制，并需求解除這種耐藥現(xiàn)象的策略。以 CD20 單克隆抗體藥物的體外功能將其劃分為Ⅰ型（ 利妥昔單抗樣） 和Ⅱ型（ 托西莫單抗樣） .Ⅰ型 CD20單克隆抗體藥物的 Fc 片度的富集增強(qiáng)了 C1q 的招募作用，顯示其激活組分的能力，將 CD20 重新分布到細(xì)胞膜微區(qū)域的脂筏上。Ⅱ型 CD20 單克隆抗體藥物不具備這些作用，而是激發(fā)同質(zhì)粘附和溶酶體介導(dǎo)的非凋亡細(xì)胞死亡[5].此外，Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體比Ⅱ型抗體更易從細(xì)胞表面內(nèi)化到細(xì)胞內(nèi)。我們對這兩類單克隆抗體的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，揭示單克隆抗體藥物的耐藥機(jī)制及應(yīng)對策略。
2 單克隆抗體藥物的細(xì)胞內(nèi)化
CD20 在惡性腫瘤細(xì)胞中高度表達(dá)，是抗體治療中理想的靶標(biāo)分子。但是產(chǎn)生抗體的漿細(xì)胞和干細(xì)胞缺失 CD20,并缺少抗原的下調(diào)現(xiàn)象。
轉(zhuǎn)基因小鼠表達(dá)人 CD20 的 B 細(xì)胞研究顯示，Ⅱ型抗 CD20 單克隆抗體較Ⅰ型單克隆抗體更易清除 B 細(xì)胞。使用Ⅱ型抗體治療需要的時(shí)間較長，程度較大，Ⅰ型和Ⅱ型單克隆抗體藥物通過不同的通路獨(dú)立介導(dǎo)補(bǔ)體激活和細(xì)胞程序性死亡。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示，Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體被內(nèi)化并在轉(zhuǎn)基因小鼠的 B 細(xì)胞中降解，這和抗 CD20 單克隆抗體處理體外原代和治療人類惡性 B 細(xì)胞的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，這一點(diǎn)和Ⅱ型抗 CD20 單克隆抗體的表現(xiàn)不同。內(nèi)化會縮短單克隆抗體藥物半衰期，并影響調(diào)理細(xì)胞的吞噬功能，這將直接導(dǎo)致單克隆抗體藥物治療效果降低和用藥費(fèi)用增多。
2. 1 單克隆抗體藥物的細(xì)胞內(nèi)化
Lim 等[6]對抗 CD20 單克隆Ⅰ型抗體的細(xì)胞內(nèi)化機(jī)制進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)中利妥昔單抗 F（ ab‘） 2 片段的結(jié)合反應(yīng)下降，表明可能有 Fc 受體參與了這個(gè)過程。當(dāng)B 細(xì)胞只表達(dá)抑制性 FcγRIIB 或使用特異性抗體封閉 FcγRIIB 時(shí)，抗體的細(xì)胞內(nèi)化作用被抑制。另外，體外實(shí)驗(yàn)表明，細(xì)胞表達(dá)的 FcγRIIB 同細(xì)胞結(jié)合的利妥昔單克隆抗體藥物呈負(fù)相關(guān)。研究還表明，mAb 的 Fc 片段和 FcγR 的 Fc 結(jié)合區(qū)域相互作用增強(qiáng)了單克隆抗體藥物的內(nèi)化作用。
�、裥涂� CD20 單克隆抗體和 FcγRIIB 通過下述兩種方式發(fā)揮作用，與相鄰的細(xì)胞發(fā)生反式作用，在單細(xì)胞表面發(fā)生順式作用。Lim 等[6]的重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞間發(fā)生的直接相互作用。結(jié)果表明，為了實(shí)現(xiàn)抗體的細(xì)胞內(nèi)化，需要Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體和 FcγRIIB 的順式相互作用，這一過程被稱為抗體的雙極橋接。有研究表明，使用利妥昔單克隆抗體藥物治療時(shí)，腫瘤細(xì)胞高水平表達(dá) FcγRIIB 的患者較低水平表達(dá)的患者的生存期明顯降低[6].另外，利妥昔單克隆抗體藥物治療濾泡性淋巴瘤患者的研究也顯示，Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體的細(xì)胞內(nèi)化作用影響了治療效果。
抗 CD20 的 Ⅰ 型 抗 CD20 單 克 隆 抗 體 和FcγRIIB 的順式相互作用與 FcγRIIB 和抗體包被抗原免疫復(fù)合物間的相互作用方式相似。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物與 B 細(xì)胞受體結(jié)合時(shí)，抗體的 Fc 片段和 FcγRIIB 通過順式發(fā)生相互作用，在細(xì)胞膜處將抑制型 FcγR 和 B 細(xì)胞受體結(jié)合； 激活抑制型 B細(xì)胞受體，對于抗原特異性 B 細(xì)胞反應(yīng)是一個(gè)負(fù)反饋。抑制型 BCR 的活化，IgG 免疫復(fù)合物引導(dǎo)FcγRIIB 的 B2 亞型的快速內(nèi)化，這個(gè)過程是不依賴細(xì)胞區(qū)域完整ITIM 序列的。上述研究表明，抗CD20Ⅰ型單克隆抗體和 FcγRIIB 的相互作用引導(dǎo)復(fù)合物向細(xì)胞膜接近，與磷酸化的 FcγRIIB ITIM 形成三聚體復(fù)合物，增強(qiáng)了復(fù)合物的細(xì)胞內(nèi)化作用，過程與免疫復(fù)合物的內(nèi)化相似。然而，Vaughan 等[7]的研究顯示，F(xiàn)cγRIIB 的突變體缺乏完整的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)，同樣可以完成對抗 CD20 的Ⅰ型單克隆抗體內(nèi)化的增強(qiáng)作用，與野生型的 FcγRIIB 效果相同。這表明 FcγRIIB 和免疫復(fù)合物之間的相互作用、抗體連接 CD20 的內(nèi)化并不是通過 FcγR 依賴的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，F(xiàn)cγRIIB 的作用可能僅限于物理結(jié)構(gòu)的相互作用。
2. 2 脂筏的作用
�、裥涂� CD20 單克隆抗體不僅與 FcγRIIB 相結(jié)合。事實(shí)上，B 細(xì)胞靶標(biāo)的抗原抗體復(fù)合物通過順式反應(yīng) FcγRIIB 結(jié)合到細(xì)胞表面，還包括單克隆抗體與 MHC Ⅱ、CD40 和 CD38的結(jié)合。然而，這些內(nèi)化作用一般不會對抗體連接受體的內(nèi)化產(chǎn)生影響，只有抗 CD38 和 CD19 的抗體會產(chǎn)生較為明顯的影響。
為了進(jìn)一步闡明抗原調(diào)變機(jī)制，研究者對脂筏結(jié)構(gòu) FcγRIIB 在單克隆抗體藥物鏈接 CD20 內(nèi)化過程中的增強(qiáng)作用進(jìn)行研究。Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體介導(dǎo)了 CD20 向脂筏的重分布，而Ⅱ型抗CD20 單克隆抗體與其他單克隆抗體直接和 B 細(xì)胞表面受體結(jié)合。此外，在與 BCR 相互作用時(shí)，F(xiàn)cγRIIB 也向脂筏重分布。向脂筏的重分布及后續(xù)的內(nèi)吞過程存在于許多受體配體復(fù)合物及病毒的內(nèi)化過程中。研究者推測，F(xiàn)cγRIIB 和利妥昔單克隆抗體藥物在脂筏上的相互作用對于增強(qiáng)內(nèi)化是必需的，這就解釋了盡管 FcγRIIB 被磷酸化，Ⅱ型抗 CD20 單克隆抗體內(nèi)化和抗體直接與其他受體的內(nèi)化比例基本相當(dāng)[8].
在脂筏的研究中，研究者使用具有 CD20 突變型的人骨髓瘤細(xì)胞作為研究對象，因?yàn)?CD20 的突變型不能重分布到脂筏上。在 FcγRIIB 缺失時(shí)，表達(dá)突變型 CD20 的細(xì)胞表現(xiàn)出比野生型細(xì)胞較慢的抗體內(nèi)化作用，這說明 CD20 向脂筏的重分布對于抗體內(nèi)化有重要影響。當(dāng)細(xì)胞共轉(zhuǎn)染 FcγRIIB 時(shí)，抗體內(nèi)化開始加速，這說明轉(zhuǎn)染的 FcγRIIB 代替了突變的FcγRIIB 引領(lǐng)突變的 CD20 向脂筏的重分布。為了驗(yàn)證這種情況，研究者利用 FcγRIIB 得到不能向脂筏重分布的突變體 FcγRIIA.突變體 FcγRIIA可以增強(qiáng) CD20 的內(nèi)化，這說明內(nèi)化過程中 CD20向脂筏的作用中 FcγRIIB 可能不是必須的。CD20內(nèi)化過程中，Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體和 FcγRIIB相互作用的具體機(jī)制尚不清楚。
內(nèi)吞作用的前提是膜的曲率，這將形成內(nèi)吞小泡。Stachowiak 等[9]對人工脂膜的研究顯示，高度擁擠的蛋白可以誘發(fā)膜形成褶皺及脂質(zhì)小管，褶皺的增加同蛋白質(zhì)濃度相關(guān)。研究者發(fā)現(xiàn)，Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體、FcγRIIB 和 CD20 在細(xì)胞膜上聚集，而Ⅱ型抗體沒有這種重分布的情況發(fā)生。Stachowiak 等人工脂膜的研究顯示，Ⅰ型抗CD20 單克隆抗體誘發(fā) CD20 和 FcγRIIB 的重分布，這可能觸發(fā)膜褶皺和隨后的內(nèi)吞。這個(gè)過程中 FcγRIIB 可能與抗體受體復(fù)合物發(fā)生強(qiáng)烈的相互作用，促進(jìn)細(xì)胞膜上高密度的蛋白招募反應(yīng)，進(jìn)而引起細(xì)胞膜的形變。但這并不能完全解釋在Ⅱ型抗 CD20 單克隆抗體的順式反應(yīng)中 FcγRIIB 和CD20 也發(fā)生相互作用，但是并沒有觸發(fā) CD20 的內(nèi)化。然而，Ⅱ型單克隆抗體 GA101 （ Obinutu-zumab） 的晶體結(jié)構(gòu)的研究表明，Ⅱ 型抗體結(jié)合CD20 的定位同Ⅰ型抗體不同。這種差異可能是順式反應(yīng)中Ⅰ型和Ⅱ型單克隆抗體同 FcγR 的相互作用的親和力和密度不同。雖然Ⅱ型單克隆抗體和磷酸化的 FcγRIIB 相互作用，但是活化的水平不高。即使對Ⅱ型抗 CD20 單克隆抗體的空間結(jié)構(gòu)進(jìn)行調(diào)整，也不能啟動(dòng)足夠的招募反應(yīng)使膜引發(fā)皺褶并發(fā)生內(nèi)吞反應(yīng)。基于上述的研究，我們認(rèn)為，Ⅱ型單克隆抗體不能誘導(dǎo) CD20 向脂筏的重分布，Ⅱ型單克隆抗體直接定向特異性的靶點(diǎn)蛋白，并保留在細(xì)胞表面而不被內(nèi)化。
3 單克隆抗體藥物的削除機(jī)制
另一種抗體耐藥性的解釋是抗體的削除機(jī)制或是 Trogocytosis 作用（ 細(xì)胞吞噬的一種機(jī)制）.Taylor 等[10]基于使用利妥昔單克隆抗體藥物的慢性淋巴細(xì)胞白血�。� Chronic lymphocytic leukemia,CLL） 患者進(jìn)行研究，提出抗體削除機(jī)制可能是患者對單克隆抗體藥物產(chǎn)生耐藥性的原因。這種機(jī)制有助于解釋在使用利妥昔單克隆抗體藥物治療初期循環(huán) CLL 細(xì)胞數(shù)量降低，但是隨著藥物的持續(xù)使用，CD20 陰性的 CLL 細(xì)胞數(shù)量逐步增加。
單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的 FcγR 依賴免疫反應(yīng)中，抗體和靶點(diǎn)復(fù)合物從靶細(xì)胞表面削除或拔掉。最初人們認(rèn)為 FcγRI 介導(dǎo)了這一過程，之后研究發(fā)現(xiàn)，抗原抗體復(fù)合物與效應(yīng)細(xì)胞 FcγR 的結(jié)合可以完成削除機(jī)制。抑制型 FcγRIIB 的小鼠實(shí)驗(yàn)也證明了削除機(jī)制的存在。而使用腹腔腫瘤小鼠得到的關(guān)于 FcγR 的數(shù)據(jù)證實(shí)補(bǔ)體發(fā)揮了一定作用。認(rèn)為單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表達(dá)的補(bǔ)體受體和補(bǔ)體自身介導(dǎo)了細(xì)胞的吞噬作用，這個(gè)系統(tǒng)的激活造成 FcγR 劃分困難。
Taylor 等[10]提出，當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞群趨于飽和疲勞時(shí)，易于發(fā)生削除效應(yīng)。削除機(jī)制后，由于單克隆抗體不在靶細(xì)胞上結(jié)合，因此，針對靶細(xì)胞的后續(xù)細(xì)胞效應(yīng)也無法完成。使用利妥昔單克隆抗體藥物后，補(bǔ)體成分和 NK 細(xì)胞被耗竭，但是沒有證據(jù)支持單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞功能下降或是衰竭。這可能是白血病或其他腫瘤細(xì)胞中豐富的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)執(zhí)行了細(xì)胞的攝取和清除功能。在正常穩(wěn)態(tài)條件下，肝臟和脾臟的吞噬細(xì)胞每秒可以清除200 萬血紅細(xì)胞。
Griffin 等[11]首次對細(xì)胞的削除機(jī)制進(jìn)行了描述，他發(fā)現(xiàn)，即使沒有調(diào)理細(xì)胞的吞噬和破壞作用，單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞也可以完成對的內(nèi)化。其之前的研究也表明，抗原抗體復(fù)合物覆蓋的細(xì)胞可以防止調(diào)理細(xì)胞的吞噬吸收（ 研究發(fā)現(xiàn)，被抗體有效覆蓋一半的靶向細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞膜發(fā)生緊密接觸） ,但不作用于調(diào)理抗體覆蓋一半的靶向細(xì)胞遠(yuǎn)端的裸露部分，因此，防止了巨噬細(xì)胞“拉鏈”吞噬的發(fā)生。雖然這些數(shù)據(jù)很好地解釋了抗體介導(dǎo)的這一過程，但是早期的研究證實(shí)，多克隆抗體較單克隆抗體的作用更大。這可能是因?yàn)槎嗫寺】贵w可以提高同受體（ B 細(xì)胞受體） 的結(jié)合，進(jìn)而誘導(dǎo)產(chǎn)生超交聯(lián)效應(yīng)，如利妥昔單克隆抗體藥物可以識別更離散的抗原，并形成較早期研究更小的“帽”.幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室的研究都顯示出類似的結(jié)果，其他多種單克隆抗體（ 曲妥珠單克隆抗體藥物，西妥昔單克隆抗體藥物，T101,依帕珠單克隆抗體藥物，達(dá)利珠單克隆抗體藥物，CD22/CD20雙特異性抗體和 CD3/TROP-2 雙特異性抗體） 的削除機(jī)制發(fā)生在靶細(xì)胞上[12].
建立適合不同細(xì)胞類型、設(shè)計(jì)合理的單克隆抗體，可以有效避免耐藥性的產(chǎn)生。如： 選用Ⅱ型抗 CD20 單克隆抗體，如 obinutuzumab,或在注射rituximab 的同時(shí)，注射降低內(nèi)化作用的單克隆抗體藥物，以克服內(nèi)化機(jī)制的影響。為了克服因抗原丟失造成的不利影響，有研究者提出多次低劑量注射抗體的用藥策略，試圖充分清除細(xì)胞，但沒有成功，其建議對效應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行浸潤處理或使用其他直接靶向單克隆抗體，提高藥物在 CLL 患者中的響應(yīng)率。
在Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)中，利妥昔單克隆抗體藥物的劑量遞增試驗(yàn)對于 CLL 患者的有效率高于每周 1 次注射（ 劑量為 2 250 mg /m2）[10].此外，最近一項(xiàng)使用低劑量利妥昔單克隆抗體藥物針對之前治療無效的 CLL 患者的隨機(jī)Ⅱ期臨床試驗(yàn)中，因其效果低于標(biāo)準(zhǔn)方法 FCR,在實(shí)驗(yàn)早期即終止。表明實(shí)驗(yàn)中削除機(jī)制沒有限制藥物的有效性，低劑量利妥昔單克隆抗體藥物不增加 CLL 患者的療效，但是這些結(jié)果受米托蒽醌入的干擾。
CD20 陰性細(xì)胞的出現(xiàn)是更大的問題，Taylor等[10]認(rèn)為，其是解除抑制的循環(huán)細(xì)胞，或被效應(yīng)細(xì)胞削除后逃脫免疫效應(yīng)細(xì)胞作用的循環(huán)和傳遞細(xì)胞，或最終被清除的是上述某類細(xì)胞。Taylor等[10]認(rèn)為，削除機(jī)制是一個(gè)次要而獨(dú)立的過程，只有當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞浸潤或耗盡時(shí)，才對耐藥循環(huán)細(xì)胞發(fā)揮作用[13].
Boross 等[14]的研究支持后者的觀點(diǎn)，清除的都是被削除的細(xì)胞，RTX 誘導(dǎo)的 CD20 吞噬作用依賴于 RTX 的濃度，并和 CD20 的療效相關(guān)，兩個(gè)過程是密切相關(guān)的。如果在體外使用乳膠珠，人工造成小鼠或人類巨噬細(xì)胞的飽和，削除機(jī)制中飽和相關(guān)的損失減少，相應(yīng)的吞噬作用也下降。另外，Pedersen 等[15]的研究表明，抗 CD20 的Ⅰ型和Ⅱ型單克隆抗體都可能介導(dǎo)發(fā)生削除機(jī)制。盡管兩者的削除機(jī)制類似，在體外和小鼠試驗(yàn)中，Ⅱ型單克隆抗體較Ⅰ型單克隆抗體介導(dǎo)的削除機(jī)制更強(qiáng)，這可能與Ⅱ型單克隆抗體缺少內(nèi)化機(jī)制有關(guān)。最近，一項(xiàng)針對 CLL 患者的頭對頭臨床試驗(yàn)中，Ⅱ型單克隆抗體 Obinutuzumab 和利妥昔單克隆抗體藥物聯(lián)合苯丁酸氮芥，使無進(jìn)展生存期延長近 1 倍（ 盡管 obinutuzumab 劑量較高） .總之，在抑制Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體有效性的過程中，細(xì)胞內(nèi)化作用較削除機(jī)制的影響更大。
4 單克隆抗體和抑制性 FcγRIIB 的其他相互作用
4. 1 靶細(xì)胞的順式作用
順式作用是指單克隆抗體藥物靶向特異細(xì)胞自身的表面受體 FcγRIIB發(fā)生的相互作用，并發(fā)生后續(xù)效應(yīng)。首先，抗體和FcγRIIB 之間的順式作用可以與反式細(xì)胞表達(dá)其他 FcγR 競爭，進(jìn)而降低后續(xù)的. FcγR 依賴的免疫效應(yīng)。有研究者使用腫瘤靶向治療抗體對轉(zhuǎn)染FcγRIIB 的黑色素瘤的小鼠進(jìn)行治療，結(jié)果顯示，非轉(zhuǎn)染 FcγRIIB 的黑色素瘤的小鼠比較，使用轉(zhuǎn)染 FcγRIIB 的黑色素瘤的小鼠生存期明顯縮短。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，這種效應(yīng)獨(dú)立于 FcγRIIB 胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，具有較低的抗體依賴性的細(xì)胞毒作用。我們推測，F(xiàn)cγRIIB 和治療性單克隆抗體間發(fā)生順式作用，于反式專業(yè)吞噬細(xì)胞表達(dá)的活性 FcγR.通過加強(qiáng) FcγR 活化，吞噬細(xì)胞可以作為輔助促進(jìn)免疫反應(yīng)，通過抗原提呈細(xì)胞降低吞噬細(xì)胞的攝取作用[16],同時(shí)，也減低了針對腫瘤特異抗原的抗原特異性免疫反應(yīng)。
FcγRIIB 和治療性單克隆抗體間的順式作用可能結(jié)合抗體的 Fc 片段，而與補(bǔ)體蛋白形成競爭。Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體與補(bǔ)體的高效作用，激活經(jīng)典的補(bǔ)體級聯(lián)反應(yīng)，其對于體內(nèi)的抗體治療是不必要的。研究表明，通過反式的 FcγRIII 表達(dá)，補(bǔ)體成分 C1q 和 C3 抑制Ⅰ型抗 CD20 單克隆抗體激活 NK 細(xì)胞，從而減少 ADCC 效應(yīng)。這可能是由于補(bǔ)體和 FcγR 對于 Fc 片段結(jié)合的競爭而形成的。雖然沒有實(shí)驗(yàn)證明，但是類似情況發(fā)生在補(bǔ)體和順式表達(dá)的 FcγRIIB 之間，這兩種蛋白競爭結(jié)合治療性單克隆抗體的 Fc 片段。因此，對于單克隆抗體治療，補(bǔ)體激活具有重要意義，但是與 FcγRIIB 的順式相互作用會影響治療效果。
4. 2 靶細(xì)胞的反式作用
研究顯示，靶向 B 細(xì)胞表面受體的單克隆抗體藥物通過順式和反式與FcγRIIB 結(jié)合。與反式吞噬細(xì)胞表達(dá)的 FcγRIIB的作用較直接靶向單克隆抗體藥物的治療效果差，可能是由于 Fc 上的結(jié)合位點(diǎn)和吞噬細(xì)胞的活化 FcγR 競爭，抑制了細(xì)胞活化，進(jìn)而對 FcγRIIB產(chǎn)生了抑制作用。單克隆抗體藥物引起 FcγR 活化和 FcγRIIB 抑制的比率稱為活化抑制率，可以通過細(xì)胞 FcγR 的表達(dá)量和單克隆抗體藥物 IgG的亞型進(jìn)行檢測。小鼠 IgG1 抑制 FcγRIIB 的結(jié)合能力高于 IgG2a,因此，小鼠 IgG1 藥物的活化抑制率更低，藥物的治療效果差。Nimmerjahn 等[17]
利用小鼠轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞系對單克隆抗體藥物和 FcγRIIB 相互作用對藥效的影響，以及活化抑制率的重要性進(jìn)行了研究。利用直接靶向腫瘤的單克隆抗體藥物、IgG2a 亞型單克隆抗體藥物對小鼠進(jìn)行治療，這種藥物的活化抑制率為 70,結(jié)果顯示，相對于沒有藥物治療的對照組動(dòng)物，治療組的肺轉(zhuǎn)移率明顯下降，幾乎為零。相反，IgG1 亞型單克隆抗體藥物活化抑制率較低（ 0. 1） ,IgG1 亞型單克隆抗體藥物治療的小鼠肺轉(zhuǎn)移未減少。然而，將小鼠編碼 FcγRIIB 的基因敲除，單克隆抗體藥物只能和活性的 FcγR 結(jié)合，IgG1 亞型單克隆抗體藥物的治療效果明顯增強(qiáng)。因此，單克隆抗體藥物和 FcγRIIB 之間的反相結(jié)合將直接影響治療效果。其機(jī)制與人類的多種腫瘤治療有關(guān)，如：40% 惡 性 黑 色 素 瘤 的 轉(zhuǎn) 移 性 腫 瘤 中 檢 測 到FcγRIIB 的表達(dá)。腫瘤細(xì)胞自身（ 或相關(guān)非造血細(xì)胞） FcγRIIB 的異位表達(dá)，腫瘤細(xì)胞周圍中效應(yīng)細(xì)胞表達(dá)的活化 FcγR,和單克隆抗體藥物形成競爭結(jié)合，降低了治療性單抗活化抑制率和臨床治療效果。
5 單克隆抗體耐藥性的應(yīng)對策略
通過對抗 CD20 單克隆抗體藥物的研究，我們認(rèn)為，治療性單克隆抗體藥物和 FcγRIIB 的結(jié)合是導(dǎo)致單克隆抗體藥物耐藥的重要原因。Roghanian 等[15]聯(lián)合使用 FcγRIIB 特異性封閉抗體6G11 和利妥昔單克隆抗體藥物，對小鼠表達(dá)人 CD20 和 FcγRIIB 進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。表明 FcγRIIB 特異性封閉抗體降低了體外實(shí)驗(yàn)中 B 細(xì)胞表面 CD20 的內(nèi)化，提高了機(jī)體內(nèi) B 細(xì)胞的耗竭。此外，觀察到類似的 B 細(xì)胞消耗增大，6G11 突變體 N297Q 與利妥昔單克隆抗體藥物聯(lián)合使用時(shí)，利妥昔單克隆抗體藥物的Fc 片段無法與 FcγR 結(jié)合。這表明通過防止單克隆抗體藥物在 FcγRIIB 和靶點(diǎn)間形成雙極抗體橋接，減少了部分的利妥昔單克隆抗體藥物介導(dǎo)的內(nèi)化，進(jìn)而增強(qiáng)治療效果。
除了抑制內(nèi)化，阻斷雙極抗體橋接形成也能增加單克隆抗體和反式表達(dá) FcγR 的相互作用。使用 FcγRIIB 阻斷抗體，如6G11,也可以防止單克隆抗 體 藥 物 與 反 式 的 吞 噬 細(xì) 胞 和 腫 瘤 細(xì) 胞FcγRIIB 的結(jié)合，進(jìn)而提高活化抑制率，最終達(dá)到提高治療效果的目的。
實(shí)用藥物與臨床2017 年第20 卷第1 期 Practical Pharmacy And Clinical Remedies,2017,Vol.20,No.1·111·治療單克隆抗體藥物同 6G11 聯(lián)合使用的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果，值得期待。如果成功，阻斷 FcγRIIB的單克隆抗體藥物將可能用于多種靶向單克隆抗體藥物的聯(lián)合治療�？� FcγRIIB 的單克隆抗體藥物可以阻斷下游抑制性信號通路，增加靶向單克隆抗體藥物的治療效果。然而，有研究表明，反向表達(dá)的 FcγRIIB 的交叉連接對于某些單克隆抗體藥物（ 如抗 CD40 的藥物） 是必須的，阻斷 FcγRIIB 不利于單克隆抗體藥物發(fā)揮作用，因此，在使用這種方法之前需要對抗體發(fā)揮作用的機(jī)制進(jìn)行評估。
6 結(jié)論
單克隆抗體藥物已經(jīng)改變疾病治療的方式，尤其是在腫瘤領(lǐng)域。自 1997 年利妥昔單克隆抗體藥物上市，已有大量單克隆抗體藥物進(jìn)入臨床。這種治療不同于常規(guī)的化療，其耐藥機(jī)制也有所不同。我們對內(nèi)化機(jī)制、消除機(jī)制以及 FcγRIIB介導(dǎo)的其他耐藥機(jī)制進(jìn)行了介紹，特別是抗 CD20單克隆抗體藥物的耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展。如果克服抗體耐藥的策略行之有效，將為抗體的臨床治療提供更廣闊的前景。
參考文獻(xiàn)：
[1] Kohler G,Milstein C. Continuous cultures of fused cells secre-ting antibody of predefined specificity[J]. Nature,1975,256（ 5517） : 495-497.
[2] Baumer S,Baumer N,Appel N,et al. Antibody-mediated de-livery of anti-KRAS-siRNA in vivo overcomes therapy resist-ance in colon cancer[J]. Clin Cancer Res,2015,21（ 6） : 1383-1394.
[3] Garrido G,Rabasa A,Garrido C,et al. Preclinical modeling ofEGFR-specific antibody resistance: oncogenic and immune-as-sociated escape mechanisms[J]. Oncogene,2014,33 （ 24 ） :3129-3139.
[4] Gu J,Fang X,Hao J,et al. Reversal of P-glycoprotein-media-ted multidrug resistance by CD44 antibody-targeted nanocom-plexes for short hairpin RNA-encoding plasmid DNA delivery[J]. Biomaterials,2015,45: 99-114.
[5] Iida M,Brand TM,Starr MM,et al. Overcoming acquired re-sistance to cetuximab by dual targeting HER family receptorswith antibody-based therapy[J]. Mol Cancer,2014,13: 242.
[6] Lim SH,Vaughan AT,Ashton-Key M,et al. Fc gamma recep-tor IIb on target B cells promotes rituximab internalization andreduces clinical efficacy [J]. Blood,2011,118 （ 9 ） : 2530-2540.
[7] Vaughan AT,Chan CH,Klein C,et al. Activatory and inhibito-ry Fcgamma receptors augment rituximab-mediated internaliza-tion of CD20 independent of signaling via the cytoplasmic do-main[J]. J Biol Chem,2015,290（ 9） : 5424-5437.
[8] Perez-Callejo D,Gonzalez-Rincon J,Sanchez A,et al. Actionand resistance of monoclonal CD20 antibodies therapy in B-cell Non-Hodgkin Lymphomas[J]. Cancer Treat Rev,2015,41（ 8） : 680-689.
[9] Stachowiak JC,Hayden CC,Sasaki DY. Steric confinement ofproteins on lipid membranes can drive curvature and tabulation[J]. Proc Natl Acad Sci U S A,2010,107（ 17） : 7781-7786.
[10] Taylor RP,Lindorfer MA. Fc gamma-receptor-mediated trogo-cytosis impacts mAb-based therapies: historical precedence andrecent developments[J]. Blood,2015,125（ 5）: 762-766.
[11] Griffin FM Jr,Griffin JA,Silverstein SC. Studies on the mech-anism of phagocytosis. II. The interaction of macrophages withanti-immunoglobulin IgG-coated bone marrow -derived lym-phocytes[J]. J Exp Med,1976,144（ 3） : 788-809.
[12] Asokan M,Rudicell RS,Louder M,et al. Bispecific antibodiestargeting different epitopes on the HIV-1 envelope exhibitbroad and potent neutralization[J]. J Virol,2015,89 （ 24 ）:12501-12512.
[13] Martin V,Corso S,Comoglio PM,et al. Increase of MET genecopy number confers resistance to a monovalent MET antibodyand establishes drug dependence[J]. Mol Oncol,2014,8（ 8）:1561-1574.
[14] Boross P,Jansen JH,Pastula A,et al. Both activating and in-hibitory Fc gamma receptors mediate rituximab-induced trogo-cytosis of CD20 in mice[J]. Immunol Lett,2012,143（ 1） : 44-52.
[15] Pedersen AE,Jungersen MB,Pedersen CD. Monocytes mediateshaving of B-cell-bound anti-CD20 antibodies[J]. Immunolo-gy,2011,133（ 2） : 239-245.
[16] Lee JS,Kang JH,Boo HJ,et al. STAT3-mediated IGF-2 secre-tion in the tumour microenvironment elicits innate resistance toanti-IGF-1R antibody[J]. Nat Commun,2015,6: 8499.
[17] Lee SM,Kim BJ,Chung JK,et al. Targeting three distinctHER2 domains with a recombinant antibody mixture over-comes trastuzumab resistance[J]. Mol Cancer Ther,2015,14（ 3） : 669-680.
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